CDMO企业实验室常用的保菌方法

CDMO企业实验室常用的保菌方法

　CDMO企业菌种保藏是指保持微生物菌株的活力和遗传性状的技术。微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退。菌种保藏的目的就是使菌株存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异，保持菌种原有的活性和各种特征。菌种保藏的基本原理是使微生物的生命活动处于半永jiu性的休眠状态，也就是将微生物的新陈代谢作用限制在最di范围内。
　　实验室常用的保菌方法有：甘油保菌法、斜面保菌法、穿刺保菌法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、冷冻干燥法。微基生物在以上几种菌种保藏方法的基础上，开发出了保菌效果更好瓷珠保菌法。
　　一、甘油保菌法
　　此方法适用于菌种的中长期保藏，保藏时间可在1年以上。由于甘油本身十分粘稠，很难定量，因此一般将甘油和生理盐水按1:1的比例配成终浓度为50%的甘油溶液。使用时，按50%甘油：菌液=1:1的比例混合，使甘油终浓度在20-30%即可，甘油浓度过高或过低都不利于菌种保藏。将甘油菌种转移至-80℃冰箱长期冻存。需要取用菌种的时候，将冻存管放在37℃水浴中快速解冻，直到菌种wan全融化，此时可取出菌种进行实验。
　　此方法适用范围广，操作简单，保藏期长，菌种不容易发生变异。
　　二、斜面保菌法
　　将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后转移至4℃冰箱中保藏。保藏的时间根据微生物的种类而不同，一般霉菌、放线菌及产芽孢的细菌保存2-4个月就需要移种一次，酵母菌为两个月，而细菌最好一个月移种一次。需要取用菌种的时候，可用接种环在斜面上挑取少量菌体进行接种。
　　此方法的优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异或污染杂菌等。缺点是保藏期短，菌种容易变异，因为培养基的物理和化学性质不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢发生改变，且此方法污染杂菌的机会较高。
　　三、穿刺保菌法
　　准备一管半固体培养基，用接种针挑取菌种，自半固体培养基的中心垂直刺入，直至接近试管底部，但不要穿透，然后沿原穿刺线将接种针退出，于4℃冰箱保存。此方法同斜面保菌法一样需要定期移种。
　　四、液体石蜡覆盖保藏法
　　此方法是斜面保菌的辅助方法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后注入无菌液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置在4℃冰箱中保藏。液体石蜡可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，同时可以让菌体与空气隔绝，减弱菌种的代谢作用，延长保藏时间。需要取用菌种时，用接种环从斜面上挑取少量菌种即可。
　　此方法的优点是操作简单，不需要特殊的设备，且不需要频繁移种，保藏时间较长。缺点是保存时必须直立放置，占用空间较大。
　　五、沙土保藏法
　　将培养好的菌种与无菌沙土混合，使菌体吸附在沙土载体上，干燥后转移至4℃冰箱保存。需要取用菌种的时候，取出少量沙土颗粒即可。
　　此方法操作简单，菌种的保藏时间长。
　　六、冷冻干燥法
　　将菌种冷冻，在减压下利用升华作用去除水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而使菌种长期维持存活的状态。需要取用菌种的时候，用无菌水或培养基重悬菌体，将菌悬液转移至固体培养基平板上进行培养。